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LABORATORIO DE BIOLOGÍA DE LA REPRODUCCIÓN

Nuestro laboratorio está acreditado desde 2001 por la Red Latinoamericana de Reproducción Asistida REDLARA, que dicta parámetros de calidad para que los centros de Reproducción asistida se adapten a ellos con las más estrictas normas de calidad.

En Fecundart se realizan todas las técnicas de fertilización desde inseminaciones uterinas, ICSI, FIV, ovodonaciones, donación de semen, congelación de gametos y diagnóstico genético pre- implantatorio. (ver Técnicas en Reproducción Asistida)

Nuestros biólogos tienen una vasta experiencia en el campo de la reproducción asistida. Se capacitan periódicamente e incorporan técnicas nuevas y eficaces probadas en los principales centros de Europa y EEUU.

Los profesionales de nuestra institución participan en forma permanente de congresos y convenciones mundiales de la especialidad.

Contamos con el banco de óvulos más grande del interior del país. Todo esto, gracias a una adecuada puesta a punto de la técnica de vitrificación (congelación). La vitrificación es una técnica que requiere de un amplio conocimiento de quien la realiza.

En este laboratorio se fertilizó el óvulo que dio el primer bebé proveniente de óvulos vitrificados de Córdoba.

 

  • Laboratorio de Andrología:

En este laboratorio especialmente diseñado y equipado se realizan las siguientes determinaciones:

Espermograma y espermocitograma. Determinación de la viabilidad de los espermatozoides y porcentaje de células peroxidasa positivas, morfología estricta (Kruger).

Se realizan técnicas de selección y mejoramiento del semen: percoll y swim-up.

Estudio bacteriológico seminal: investigación de micoplasma, ureaplasma (por cultivo y tipificación de los mismos) y cultivo  de Chlamydia trachomatis.

Este laboratorio dispone también de la posibilidad del estudio por microscopía electrónica de aquellos casos que así lo justifiquen como en el síndrome de cilias inmóviles.

Estudios inmunológicos: determinación de la presencia de anticuerpos antiespermatozoides (IgG).

 

 

  • Laboratorio de Biología y Análisis Especializados:

Este laboratorio nos permite realizar distintas técnicas que contribuyen al diagnóstico de la esterilidad femenina:

Determinaciones hormonales (RIA y ELISA): FSH, LH, ESTRADIOL, PROGESTERONA, PROLACTINA, TSH, T3, T4, T4 libre, B hCG.

Estudios realizados en el día en aquellos casos que lo demanden.

Estudio inmunológico de la abortadora habitual: Anti-DNA, Anti- nucleares, anti-peroxidasa, anti-tiroglobulina y la determinación de anticoagulante lúpico y anticuerpos anticardiolipinas para el diagnóstico del síndrome fosfolipídico.

IgG para Chlamydia trachomatis y del antígeno de esta bacteria, como así también y el aislamiento de Micoplasma hominis y Ureaplasma urealiticum en muestras endocervicales, teniendo en cuenta que es alta la incidencia de la infección con estos gérmenes en las obstrucciones tubarias y diferentes afecciones endometriales.
Otras determinaciones como marcadores tumorales (CA 125) y de falla ovárica prematura (Inhibina B).

Anticuerpos anti-espermatozoides (del tipo IgG e IgA).

 

EspermogramaEspermatozoides

 

CONDICIONES PARA ESPERMOGRAMA

 

La muestra de semen debe recogerse tras un mínimo de 48 horas de abstinencia sexual, pero no mas de 5 días, por masturbación, en un recipiente estéril para orina, ya que el coito interruptus puede contaminar la muestra con secreciones vaginales, y verse afectada la movilidad por el pH ácido, así como perderse parte de la misma. Igualmente, el uso de preservativos convencionales no es aceptado, ya que la mayoría contienen sustancias espermicidas que afectarían a la calidad espermática, muestras recolectadas fuera de estos parámetros son rechazadas.

Es conveniente evitar las temperaturas extremas (menos de 20ºC y más de 40ºC) durante el transporte de las muestras al laboratorio, una muestra traída fuera de este rango es rechazada.

Es preferible que los pacientes obtengan la muestra dentro de la clínica.

Tras la recolección, debe anotarse el nombre del paciente, el período de abstinencia, fecha y hora de recogida, y el intervalo entre el momento de la eyaculación y el análisis, que no debe ser nunca mayor de 45 minutos, es por eso que la muestra debe ser traída dentro de los 40 minutos, fuera de este tiempo las muestras son rechazadas u observadas. También se preguntará al paciente sobre la posibilidad de pérdida de alguna fracción del eyaculado, ya que la primera fracción es la más rica en espermatozoides, de forma que un análisis anómalo en volumen o concentración espermática puede venir causado por este hecho. También se le pregunta si el transporte de la muestra fue adecuada y si ha tenido fiebre en los últimos días o si consume o ha consumido algún tipo de droga.

 

 

Objetivos:

Entender aspectos y componentes del semen y valorar potencial clínico de la información.

 

 Valores normales de los indicadores del espermograma:

Indicadores Valores normales
Volumen eyaculado >1,5 mL
pH del semen >7,2
Concentración espermatozoides/mL > 15 000 000
Conteo total de espermatozoides > 39 000 000
Movilidad lineal progresiva (a+b) > 40 %
Movilidad lineal rápida (a) > 32 %
Morfología normal > 50 %
– Criterio estricto >4 %
Viabilidad > 58 %
Aglutinaciones < 50 %

 

NOMENCLATURA DESCRIPTIVA DE LOS HALLAZGOS DEL ESPERMOGRAMA

– Normozoospermia: Concentración de espermatozoides > 15 000 000/mL.

– Oligozoospermia: Concentración de espermatozoides > 15 000 000/mL.

– Astenozoospermia: Menos del 40 % de espermatozoides con progregresión lineal (movilidad a+b) o menos del 25 % con progresión rápida (movilidad a).

– Teratozoospermia: Menos del 50 % de espermatozoides con morfología normal.

– Azoospermia: Ausencia de espermatozoides en el eyaculado.

– Aspermia: Ausencia de eyaculado externo.

– Leucocitospermia: Presencia de > 1 000 000, de leucocitos/mL.

 

AnálisisMacroscópico:

Apariencia, Licuefacción, Viscosidad, Volumen, color y PH.

APARIENCIA

El semen normal recién eyaculado tiene una apariencia homogénea y gris-opalescente a la inspección simple. Si la apariencia es anormal, el laboratorio debe consignar qué tipo de anormalidad existe. En ocasiones, el semen puede aparecer menos opaco si la concentración de espermatozoides es muy baja, otras veces es de color carmelita, pardo o marrón si contiene hematies. En los pacientes con esta última alteración, conocida con el nombre de hemospermia o hematospermia, es necesaria una valoración cuidadosa por un urólogo.

VISCOSIDAD

No se conoce la causa por la cual en algunos pacientes se observa una consistencia aumentada o la presencia de bridas mucosas, aunque algunos autores han sugerido que podría ser un signo de infección.

La importancia de este hallazgo es que el médico debe conocer que esta alteración puede interferir la medición de otros indicadores como la concentración y la movilidad de los espermatozoides; por tanto, cuando se informa esto y hay alteraciones de esos indicadores es necesario repetir el espermograma antes de dar conclusiones al paciente.

VOLUMEN EYACULADO

Los criterios de normalidad en relación con el volumen de semen eyaculado también ha sufrido variaciones. En nuestro laboratorio consideramos como normal el volumen entre 1,5 y 6 mL, mientras que en la última edición del Manual de la OMS se considera normal 2 mL o más; según este último criterio nunca podría hablarse de un volumen aumentado. Nosotros seguimos aceptando como límites normales las primeras cifras, o sea entre 1,5 mL y 6 mL, por razones que expondremos a continuación.

El volumen puede hallarse disminuido (< 1,5 mL) en los pacientes con obstrucciones totales o parciales de las vías seminales. En el síndrome de ausencia funcional de los conductos eyaculadores2 se halla un volumen muy disminuido, habitualmente menos de 1 mL, acompañado de otras alteraciones del eyaculado que analizaremos más adelante. Otros trastornos que pueden dar lugar a un volumen disminuido son el síndrome de Klinefelter y el hipogonadismohipogonadotrópico, por la baja estimulación androgénica de las vesículas seminales.

La ausencia total de eyaculado, que se denomina aspermia, se observa con más frecuencia en pacientes con eyaculación retrógrada o con hipogonadismo severo.5,7

Algunos autores han sugerido que un volumen seminal aumentado (> 6 mL) puede ser un signo de infección de las vías seminales y, en particular, de las vesículas seminales. Nosotros no hemos encontrado ninguna relación entre el volumen seminal y la presencia de infecciones, pero sí hemos observado que cuando un paciente tiene un volumen aumentado con gran frecuencia se asocian alteraciones de otros indicadores seminales.20,21

PH DEL SEMEN

El pH del semen varía normalmente en un rango muy estrecho (7,2 – 8,0), pocos son los trastornos capaces de alterarlo. Es importante asegurarse que el laboratorio esté usando el papel de pH adecuado pues de otra manera las lecturas pueden ser falsas; el mejor es el papel con rango 6,4 – 8,0, que es el que más se ajusta al pH del semen, pero en su defecto puede usarse el de rango 6,1 – 10,0.

Se ha sugerido que un pH elevado (> 8) puede considerarse un signo de infección seminal si se asocia a otros síntomas y signos de sospecha,1,5 mientras que un pH disminuido (< 7,2) se observa cuando existe un déficit de la función de las vesículas seminales, en especial en pacientes con el síndrome de ausencia funcional de los conductos eyaculadores

Análisis Microscópico:

Numeración, motilidad y cinética, vitalidad, morfología, aglutinados, células redondas. También se distinguen los granulocitos por método de la peroxidasa de las células provenientes de la progenie espermática.

A las muestras con muchos aglutinados se realiza la prueba de Mart Test para saber si hay un factor inmunológico.( se realizan pruebas periodicas de testigos positivos y negativos)

CONTEO DE ESPERMATOZOIDES/mL (NUMERACION)

Las cifras “normales” tomadas de una población general, sin tener en cuenta su fertilidad, han variado a través del tiempo; de la cifra entre 60 y 120 000 000/mL que aparece en libros de texto antiguos se ha llegado al criterio actual de normalidad (normozoospermia), que un comité de expertos de la OMS ha situado en la cifra de 15 000 000/mL o más.

Se ha definido como oligozoospermia a la concentración de espermatozoides menor de 15 000 000/mL,a su vez esta puede dividirse en 3 grados:

  1. a) oligozoospermia ligera: cifras entre 10 y 15 000 000/mL,
  2. b) oligozoospermia moderada: concentración entre 5 y 10 000 000/mL y
  3. c) oligozoospermia severa cuando el conteo está por debajo de 5 000 000/mL.

La severidad de la oligozoospermia no nos permite conocer la causa del trastorno y en cuanto al pronóstico actualmente sólo es posible afirmar que cifras inferiores a 5 000 000/mL (oligozoospermia severa) tienen una relación inequívoca con el grado de fertilidad del sujeto en cuestión; por encima de esa cantidad los resultados son variables pues no se ha hallado una relación constante y resulta frecuente observar embarazos con concentraciones entre 10 y 20 millones/ml.

La azoospermia se define como la ausencia de espermatozoides en el semen e indica un daño severo del epitelio germinal (azoospermia secretora), cuyas causas más comunes son la aplasia germinal o síndrome de sólo células de Sertoli y la detención de la maduración espermática o arresto de la espermatogénesis, también puede deberse a una obstrucción total de las vías seminales (azoospermia obstructiva);1-7,9 el hallazgo de azoospermia en una muestra de semen, ya sea secretora u obstructiva, es siempre de muy mal pronóstico, según nuestra experiencia, prácticamente nunca responde al tratamiento aunque se conozca su causa precisa.10

CONTEO TOTAL DE ESPERMATOZOIDES

El conteo total de espermatozoides suele reflejar el estado de la espermatogénesis, pero también está en relación directa con el volumen eyaculado y con el período de abstinencia sexual previo.1,2,11Se calcula con una simple operación aritmética de multiplicador la concentración de espermatozoides/mL por el volumen eyaculado. En la actualidad se considera normal cuando la cifra es de 40 000 000 de espermatozoides o más.1,5 Este indicador tiene las mismas implicaciones y limitaciones que la concentración/mL.

MOVILIDAD DE LOS ESPERMATOZOIDES

Para la correcta evaluación de la movilidad, el espermograma debe haber sido hecho en las primeras 2 h de haberse producido el eyaculado, a un mayor intervalo de tiempo desde la eyaculación se hallará un menor porcentaje de espermatozoides móviles. En años recientes se han desarrollado nuevas técnicas que permiten medir objetivamente y con medios computadorizados las características del movimiento de los espermatozoides, pero los equipos no están disponibles en muchos centros, pues son costosos. Por esta razón, la OMS recomienda un sistema simple de medir la movilidad espermática sin necesidad de equipos complejos, para esto la movilidad se divide en 4 categorías, a saber: a) movilidad progresiva rápida, b) movilidad progresiva lenta, lineal o no, c) movilidad no progresiva y d) inmovilidad (espermatozoides inmóviles).

Se considera normal cuando el 40 % de los espermatozoides o más presentan una movilidad progresiva rápida (categoría a).La disminución de la movilidad se denomina astenozoospermia, puede ser un hallazgo aislado en el espermograma o acompañarse de alteraciones en la concentración y morfología normal de los espermatozoides (que es lo más común), en este último caso indica un daño global de la espermatogénesis. La disminución de la movilidad espermática tiene múltiples causas que no son posible diagnosticar por el simple análisis seminal y en la mayoría de los casos tampoco es posible establecer un pronóstico por este examen. Una excepción a lo dicho anteriormente es el hallazgo de una movilidad menor del 5 % o incluso nula por completo, asociada a densidad, morfología y viabilidad espermática normal o muy cercanas a lo normal, en este caso es muy probable se trate de un síndrome de cilias inmóviles, trastorno de causa genética que es irreversible y que por tanto hasta el presente los pacientes son definitivamente estériles; el diagnóstico de certeza se realiza por medio de la microscopia electrónica.

Se considera que es menos probable que un hombre sea fértil si tiene menos del 40 % de espermatozoides con movimiento lineal progresivo, pero no existe una relación directa entre el porcentaje de espermatozoides móviles y la fertilidad potencial de un individuo.

En ocasiones, al analizar el semen por el microscopio, se observan espermatozoides aglutinados, estas aglutinaciones pueden ser cabeza-cabeza, cola-cola, pieza intermedia-pieza intermedia o cualquier otra combinación. La aglutinación puede ser un fenómeno normal siempre que no afecte a más del 10 % de los espermatozoides del eyaculado.Cifras mayores pueden deberse a trastornos inmunológicos o a infecciones.Es importante conocer que la aglutinación puede interferir la medición de la movilidad y si tenemos una muestra de semen donde se informa aglutinación y movilidad disminuida es necesario repetir el examen antes de hacer conclusiones.

VIABILIDAD DE LOS ESPERMATOZOIDES

Cuando en un espermograma se comprueba astenozoospermia es necesario medir la viabilidad o porcentaje de espermatozoides vivos; esto permite precisar si la baja movilidad se debe en realidad a que existe un gran número de espermatozoides muertos, lo que habitualmente tiene un peor pronóstico. En 1986, la OMS daba como valor normal el hallazgo de 60 % o más de espermatozoides vivos, en la segunda edición del Manual de laboratorio de la OMS para el examen del semen humano,se daba como valor normal 50 % o más de espermatozoides vivos, mientras que en la tercera edición de este Manual la cifra normal se considera 58 % o más

El hallazgo en un espermograma de una disminución de la movilidad espermática con un porcentaje normal de espermatozoides vivos sugiere la existencia de anomalías estructurales de la cola de los espermatozoides, cuyo diagnóstico de certeza sólo puede hacerse por microscopia electrónica; estas anomalías, entre las que se incluye el síndrome de cilias inmóviles mencionado anteriormente, tienen muy mal pronóstico.

Si la concentración y la morfología de los espermatozoides es normal y el porcentaje de espermatozoides muertos es mayor de lo normal el trastorno se ha denominado necrozoospermia. Este hallazgo se consideró muy raro, de pésimo pronóstico y de etiología desconocida. En la actualidad, la mayoría de los investigadores dudan de su existencia y lo atribuyen a defectos en la técnica de tinción, incluso en la última edición del Manual de la OMSno se incluye este término.

MORFOLOGÍA NORMAL DE LOS ESPERMATOZOIDES

El criterio de nivel normal de la morfología espermática ha variado a través del tiempo. Los estudios clásicos de la era moderna consideran como normal el hallazgo del 50 % o más de espermatozoides de morfología normal, cifra que utilizamos en nuestro laboratorio y que era la recomendada por la OMS.En fecha reciente se ha sugerido que cuando se utilizan criterios “estrictos” de normalidad, el límite debe ajustarse en un nivel inferior, en fecha más reciente se ha sugerido que el límite normal es 14 %.(criterios estrictos, descriptos por Kruger,)

El aumento de formas anormales puede existir aisladamente y se denomina teratozoospermia,pero con más frecuencia se asocia a alteraciones de la concentración y movilidad de los espermatozoides.

La relación de la morfología espermática con la fertilización es de difícil interpretación pues en un mismo eyaculado se presenta una gran variabilidad y en muchos espermatozoides anormales se observan múltiples defectos. No es frecuente que en un paciente dado se presente un defecto único en todos los espermatozoides o en la mayoría de ellos. Por estas razones, en la literatura no hay un acuerdo sobre si el resultado de la morfología debe expresarse en forma global (total de espermatozoides normales y anormales) o si es más conveniente especificar el porcentaje de ellos con anomalías de la cabeza, pieza intermedia y cola; incluso se ha sugerido que el número promedio de defectos por espermatozoide puede ser un predictor de su función.

La teratozoospermia puede observarse en un gran número de trastornos, como el varicocele, la sepsis seminal, el estrés y la exposición a agentes externos nocivos, entre otros, por lo cual su presencia no es suficiente para establecer un diagnóstico causal. En cuanto a su valor pronóstico, también es muy difícil de establecer, aunque es necesario aclarar que en raras ocasiones se encuentran anomalías morfológicas que invariablemente den lugar a esterilidad, entre estas tenemos los espermatozoides de cabeza redonda, los de cabeza en forma de pera y los de cabeza en forma de cabeza de alfiler. Para comunicarle al paciente su mal pronóstico recomendamos que se haya comprobado que esta anomalía existe en más del 95 % de sus espermatozoides.

OTRAS CÉLULAS EN EL SEMEN

El semen eyaculado invariablemente contiene otras células además de los espermatozoides, entre ellas se incluyen células epiteliales de la uretra, células espermatogénicas inmaduras de distintos tipos y leucocitos. La concentración del total de células debe medirse y dar su resultado en porcentaje; se considera normal que el eyaculado no contenga más del 5 % de estas células.

La presencia de células espermatogénicas inmaduras en el eyaculado es un signo de irritación del epitelio germinal y en ocasiones hemos observado este fenómeno si se producen eyaculaciones repetidas o después de un tratamiento de la oligozoospermia idiopática. Su presencia no es útil para establecer un diagnóstico causal ni para conocer el pronóstico.

Las células de mayor importancia son los leucocitos; se considera que en un eyaculado normal debe haber menos de 1 000 000/mL. La presencia de cantidades mayores de leucocitos se denomina leucocitospermia y no siempre se debe a procesos infecciosos, pero la ausencia de ellos tampoco nos asegura que no exista una sepsis de las vías seminales. No obstante, aunque la leucocitospermiaper se no asegura el diagnóstico de infección sí se considera un signo de sospecha, que en asociación con otros signos seminales y clínicos confirman dicho diagnóstico. Estos signos y síntomas son los siguientes: leucocitospermia repetida, dolor al eyacular, antecedentes de infección genitourinaria o de enfermedades de transmisión sexual, examen anormal de la próstata, epidídimos y vesículas seminales, análisis anormal del líquido prostático, alteraciones de las características físicas o bioquímicas del plasma seminal y análisis bacteriológico anormal. Seguimos los criterios de la OMS en cuanto a la combinación de 2 o más de estos signos para establecer el diagnóstico de sepsis de las vías seminales. La importancia de este diagnóstico radica en la posibilidad de su tratamiento inmediato con antibióticos específicos para así evitar secuelas a largo plazo.

LAVADO Y RECUPERACION; TEST DE SOBREVIDA

Se realizan tambiénmetodos  de lavado con posterior recuperación de espermatozoides móviles, y se espera 24 horas para ver su sobrevida. Las técnicas mas utilizadas son: swim up,  centrifugación por gradientes de densidad y columnas de anexina.

 

 

Las muestras de semen deben ser lavadas previamente antes de usarlas en una IIU o ICSI. El lavado de semen remueve el plasma seminal, espermatozoides muertos y otras células. En adición selecciona espermatozoides móviles.

La decisión en la elección del método usado dependerá del análisis previo del semen y la cantidad de espermatozoides que necesitaremos para la técnica que vamos a usar. Si la calidad del semen es buena (motilidad y numeración) se prefiere realizar migración (SWIM UP). En cambio si la calidad del semen es pobre o incluye un número aumentado de otros tipos celulares, se prefiere centrifugación con gradientes de densidad ISOLATE IRvine(Percoll). Este último método nos permite obtener una concentración mayor de espermatozoides, mientras que con el Swim-up obtenemos mayor % de móviles.

En la preparación del semen se utiliza medio de cultivo suplementado con 10% de suero sintético.

Una vez obtenida la muestra en un recipiente estéril, se la deja en reposo 30 minutos a 37ºC. Si en este tiempo no se licúa se pasa la muestra 2 veces por una aguja G 21. Posteriormente se valoran los parámetros espermáticos según los criterios de la OMS y se procede a la elección de la técnica a emplear.

 

SWIM –UP

 

Esta técnica se usa cuando la muestra de semen tiene una valoración normal en sus parámetros espermáticos de acuerdo a la OMS:

Concentración: mayor o igual a 20 millones/ml.

Motilidad: 40% o más con motilidad A+B

Morfología: 4% o más con morfología normal de Krugger

 

Fundamento: Esta técnica aprovecha la propiedad de motilidad progresiva de los espermatozoides, los cuales nadan hacia arriba en el medio de cultivo.

SEPARACION POR GRADIENTES DE DENSIDAD

 

 

Esta técnica se utiliza generalmente en casos donde la calidad espermática esta alterada o existe posibilidad de infección. Los distintos tipos de células van quedando en las diferentes capas de soluciones según su viscosidad. Luego de una centrifugación se recupera la capa con espermatozoides móviles.

 

 

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